DHEA 主要依賴于化學(xué)合成，合成步驟復(fù) 雜，中間產(chǎn)物較多，DHEA 得率和純度不易控制。相 比之下，微生物法反應(yīng)條件溫和，各種酶促反應(yīng)可實 現(xiàn) DHEA 充分游離。采用微生物發(fā)法，通過微生 物代謝酶對甾醇側(cè)鏈進(jìn)行專一性酶解，優(yōu)化了以菜籽 甾醇、谷甾醇等植物甾醇為底物高效制備 DHEA 的工 藝。SHP-250 生化培養(yǎng) 箱、GZX-9240 MBE 電熱鼓風(fēng)干燥箱：上海精宏試驗設(shè) 備有限公司；YM 75 立式壓力蒸汽滅菌器：上海三申醫(yī) 療器械公司；SB-5200D 超聲波清洗器：寧波新芝生物 科技股份有限公司。蛋白胨與甘薯生全粉按質(zhì)量比 4%混合，再按一定 液固比加入去離子水，攪拌混勻后置于 121 ℃下滅菌 15 min 得發(fā)酵培養(yǎng)基，按一定體積比于發(fā)酵培養(yǎng)基中 接種米曲霉孢子懸浮液，發(fā)酵一段時間后高溫滅菌終 止發(fā)酵，發(fā)酵后培養(yǎng)基冷卻后于 4 000 r/min 下離心 15 min，收集沉淀于 50℃下干燥并粉碎過 60目篩得發(fā) 酵產(chǎn)物。

    隨接種量升高，DHEA 得率呈明顯 先上升后下降變化趨勢。當(dāng)接種量介于 4%~10%之間 時，接種量對以甘薯生全粉為原料米曲酶發(fā)酵提取 DHEA 得率有顯著（p<0.05）影響；接種量超過 10%時， 繼續(xù)提升接種量，DHEA 得率無顯著變化；接種量為 6%時，DHEA 得率最高，達(dá) 61.32 μg/100 g。隨發(fā)酵時間延長，DHEA 得率呈顯 著先上升后下降變化趨勢（p<0.05）。發(fā)酵 36 h 時，DHEA 得率最低，僅為 12.20 μg/100 g；發(fā)酵 72 h 時，DHEA 得 率最高，為 79.34 μg/100 g。研究表明，發(fā)酵48 h~72 h 是 米曲霉生長繁殖的高峰期，發(fā)酵時間不足，發(fā)酵液中菌 絲體絕對數(shù)量不高，產(chǎn)酶不足進(jìn)而影響 DHEA 得率； 發(fā)酵時間太長，培養(yǎng)基中營養(yǎng)物質(zhì)消耗過多，米曲酶生 長減緩甚至衰亡，可水解糖苷鍵等酶的產(chǎn)量降低[20]，導(dǎo) 致培養(yǎng)基中 DHEA 不能充分游離，最終其得率下降。